實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號(hào) |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7 | 貼壁生長 | EY-X63661 |
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細(xì)胞名稱 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7
形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: Vero-HCV-P7細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的P7基因，能穩(wěn)定表達(dá)P7蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室于2008年構(gòu)建并保存。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C23
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Indole-3-acrylic acid methyl ester
CAS No.：19626-92-7
中文名：
分子式：C12H11NO2
榿木 訂購|咨詢 前列腺性酶(ACP3) 規(guī)格： 20mg
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內(nèi)酯 訂購|咨詢 前腦肽(PENK) 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial
薯蕷皂甙 訂購|咨詢 前梯度蛋白2(AGR2) 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial
HDGF 肝癌衍生生長因子抗體（高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體） 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Lornoxicam
HOXB2 同源盒蛋白B2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Losartan Potassium
HOXB8 同源盒蛋白B8抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Losartan Potassium
HSPA6 熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Masitinib
Id1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Mecillinam
LAPTM4B 溶酶體蛋白跨膜β4抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Medroxyprogesterone
LDOC1/BCUR1 癌癥亮拉鏈下調(diào)因子1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Medroxyprogesterone
LOXL2 賴酰氧酶相關(guān)蛋白2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Methimazole
玫瑰紅 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:RoseBengal 含量:超純，99%
玫瑰紅 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Rosolicacid 含量:IND，82%
玫瑰紅銀試劑 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:4Dimethylaminobenzalrhodanine 含量:ACS，90%
玫棕 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Rhodizonicacidsodiumsalt 含量:試劑級(jí)，98%
媒染藍(lán)29 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:ChromeazurolS 含量:BS
媒染藍(lán)B 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:AcidalizarinblueB 含量:ACS級(jí)
美康 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Miconazolenitrate 含量:19000～119000,液體,6條帶
鎂 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Magnesium 含量:AR，99.5%
門冬酰酶 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:AsparaginasefromEscherichiacoli 含量:BR，98%
錳 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Manganese 含量:AR，40%
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7麥康凱瓊脂規(guī)格：250g用途：用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)
CC瓊脂添加劑規(guī)格：1ml*5支用途：每支添加于90mlCC瓊脂基礎(chǔ)中
藥敏紙片規(guī)格：30ug/片，20片/瓶用途：用于藥物體外敏感性試驗(yàn)
大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基（USP）顆粒規(guī)格：250g用途：用于藥品的無菌檢測
牛奶培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于乳菌凝固力及乳鑒別試驗(yàn)
無菌采樣袋（12cm*18cm）（帶壓條）規(guī)格：100個(gè)/包用途：用于樣品的采樣（小號(hào)采樣袋）
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